CRISPRӦ��ָ�ϣ�ѡ����һ��Cas9��[ѡ������]

�����壺 �� �� С �� ʱ�䣺2016��03��01�� ��Դ������ͨ

�༭�Ƽ���

����CRISPR/Cas9�ij���ʹ�������ܹ���Ч�ؿ�չ��ȷ������Ļ��������Ρ������еĹؼ����Cas9�������Σ��ܹ��ó���������������dz��������Ȥ�Ļ��򡣲�����Ŀǰ����ô����Cas9�ɹ�ѡ����һ���ֿ�ʼ����𼱣���Addgene��ר��������㡣

CRISPR/Cas9�ij���ʹ�������ܹ���Ч�ؿ�չ��ȷ������Ļ��������Ρ������еĹؼ����Cas9�������Σ��ܹ��ó���������������dz��������Ȥ�Ļ��򡣲�����Ŀǰ����ô����Cas9�ɹ�ѡ����һ���ֿ�ʼ����𼱣���Addgene��ר��������㡣

���ȣ�������������ʵ���Ŀ�İɡ���ϣ�������ó�һ�����򣬻���ϣ�������ض�����ı������������Ե����λ����飿�����ض�λ���Dz��Ǹ������壿���ǣ����α�ۻ����飿��Щ����Ĵ𰸽����������ʵ����Ҫ����Cas9��

�����ó�ѡ�ĸ���

��׼��SpCas9

ͨ�������Ŀ�Ļ��������gRNA�ͺ�������øCas9�ɴ����ó���ϸ�����������Ŀ��ɱ��κ�~20���������DNA���аж���ǰ��������������������1) �����ڻ��������Ƕ��صģ�2) Ŀ���ڼ�����ڻ���PAM�������Ρ��������������ʺϵ�Ŀ��λ�㣬���Ҳ�̫�����Ѱ�ЧӦʱ��SpCas9�Ǻ��ʵ�ѡ��

���������ԣ�

����ʵ���gRNA���У�����ǿCas9�鵼���и�������ԡ�����������Ҳ���ö��ַ�������һ����ǿCas9�������ԡ����磬Cas9ͨ����������ø�ṹ��RuvC��HNH������˫�����ѣ�Cas9-nickase��Cas9n������������һ�㡣���������ؼ��л��е�һ��ת���ɱ����ᣨD10A��H840A�����γ���Cas9�п�ø��Ŀ��λ������Ҫ������ȷʶ���Cas9n���ӣ����ܲ���˫�����ѣ�����Ұ����SpCas9��ȴ����ǿ�������ԡ�

����Cas9n���ɱ�SpCas9�������죬������Ȼ�������Ѱ�λ���ϣ����²���ȱʧ��Ϊ�˿˷�������ƣ�����ʹ��ʧȥ����ø���Ե�Cas9��dCas9����������������Ե����к���øFokI�ںϡ�FokIֻ�ڶ��ۻ�ʱ�и�Ŀ��DNA����ˣ�ֻ�е�����dCas9-FokI������ȷ�ж�Ŀ�����У��и�Żᷢ����

Cas9n��dCas9-FokI������һ�����Ծ����������Ƕ���Ҫ�����ʵ���Ŀ�������㹻������������Ч�ز���˫�����ѡ�һЩʵ���������ýṹ����ѧ������Cas9�и��Ѱ�λ��Ĺؼ��л�������Broad�о�Ժ���ŷ�ʵ���Һ���ʡ��ҽԺ��Keith Joung�Ŷӡ���Ұ���͵�SpCas9��ȣ�����ǿ��Cas9�����ŷ棩�򡰸߱���Cas9����Joung�����и�����൱�����Ѱл��Դ�󽵵͡�

����ѡ�ĸ���

Cas9�Ķ���֮�����������DNA���������и�DNA�������Ƕ����ġ����仰˵����ʹ�и�DNA���������ƻ��������Ȼ�ܹ���Ŀ��DNA��ϡ����⣬ʧȥ����ø���Ե�Cas9��dCas9������Ϊһ��ƽ̨�����ض���DNAλ���ȥ��ͬ�Ļ���������԰Ѹ��ֵ��״���Ŀ�Ļ��򣬰���ת¼�������Ӻ��������ӡ�


����Ŀ�Ļ���

����ʹ��dCas9��ʵ���ѱ�������dCas9���ת¼��ʼλ������ԡ�ѹ�ơ�ת¼���������ڲ��鶯���ϸ���У���Ҫ�ô���ת¼�������ӵ�dCas9�ж�Ŀ�Ļ������������򣬲���ʵ�ֿɿ������ơ����Ŀ�Ļ�����ó���ϸ���ж��ԣ���ô�������Ҫ���ǻ���dCas9�����ƣ�����dCas9-KRAB��Addgene�ṩ�������������Ƹ������ֺ�ϸ�������е�Ŀ�Ļ���

�Ŀ�Ļ���

����dCas9�ļ�������ȴ����ȫ��ͬ�ġ���򵥵ļ���������ָdCas9�뵥��ת¼������ͨ����VP64�����ںϡ�������ڶ����ļ�������Ҳ���������������ò�ͬ�ķ����ı��������磬��SunTag��ϵͳͨ��dCas9�Ϳ����ںϵ��׵Ĺ����������������ļ��ͬһ������λ�㡣Synergistic Activation Mediator�����������dCas9-VP64�ںϺ����ε�gRNA�������ܹ���������RNA-���ת¼���������໥���á�

��һ����ʲô��

������Ѿ�ѡ�����ʵ���Cas9����ϲ�㣡��һ����ʲô�أ�������һЩע�����Ҳ������CRISPRʵ���а�����

��ƻ�ѡ��һ��gRNA �C ���������Ȥ��Ŀ�Ļ���һЩ��˾�ṩ�˾�����֤��gRNA����ЩgRNA�Ѿ��ɹ�Ӧ����ʵ���У���������ͬ��������ڿ��ϣ�����տ�ʼ����CRISPRʵ��ʱ�������ܽ�ʡ���ٵ�ʱ��ͳɱ���������ʵ����Ҫ�µ�gRNA����ô����ѡ��յ�gRNA���壬��������ѵ�gRNA��Ƴ���������gRNA�������С�

������ѡ���ʵ���Cas9ֻ��ʵ��ɹ���һ�룬�㻹��Ҫѡ���ʵ��ı��ϵͳ������Cas9����Ŀ��ϸ����Ŀǰ�г����и��ֺ�Cas9�������������ڲ�ͬ���ֵı�����ϸ������ĸ��ֲ��Ͳ��鶯��ȡ�������תȾ��ϸ�����������Ҫ��������������Cas9����ϸ���ڡ���Ȼ������mRNA�͵�����Ҳ����һ��ѡ��

��֤��Ļ�����༭ �C һ����Cas9��gRNA����ϸ����������ʱ��ȷ�����Ŀ�������Ƿ�õ������Ρ������������������ͬ����ȡ�����ض���ʵ�顣֮�����ǻ���ϸ���ܡ�������ͨ ���ɣ�

 

����˵����
0  ������    0 �˴β���
��¼ ע������
��������ˢ��
�鿴�������� > >

��������ͨ��Ѷ

���Ŀ�Ѷ��

��������

��ʱ����

��չ��Ϣ

��ע���ĺ�/����������Ѷ

����ͨ��ҳ | ���ն�̬ | ����ͨ�̳� | �˲��г� | ���Ŀ��� | �ؼ�ר�� | ����������

��Ȩ���� ����ͨ

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

��ϵ���䣺

��ICP��09063491��